【答】常見問題問 題回 答一個孔中應接種多少個細胞？當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100μl 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100μl 培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。能否用384孔板進行試驗？可以。向各孔中加入培養基體積10%...
【答】1. siRNA與轉染試劑比例不佳 由于siRNA序列差異、合成條件不同以及是否帶有熒光等標記，決定了RNA和轉染試劑在不同情況下會有不同的最佳條件，建議先進行預實驗優化。2. 細胞密度不佳 調整細胞密度到轉染時匯合度為20-40%。成功轉染siRNA的細胞會產生目標基因表達下調，但未成功轉染的細胞卻不受影響，這時轉染效率和總的細胞數量就很重要，一般...
【答】可能原因：洗脫強度不夠解決方案：1）增加洗脫體積數。2）一般使用中建議的10mM濃度對于大多數應用來說足夠了，但是也存在例外?？梢試L試使用50mM Tris-HCl，20-40mM 還原型谷胱甘肽，pH8.0作為洗脫緩沖液。3）洗脫緩沖液pH過低時，應調整pH到8-9.4）洗脫緩沖液的離子強度不宜太低，應控制在100-300mM氯化鈉濃度?？赡茉颍悍翘禺愋晕浇鉀Q方案：洗脫緩沖液中加入1%的Tr...
【答】可能原因：上樣流速太快，結合時間太短解決方案：GST親和層析是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白與固定的谷胱甘肽(GSH)通過硫鍵共價親和結合，GST與谷胱甘肽的結合相對緩慢，比金屬螯合親和層析純化his蛋白結合要緩慢很多。上樣流速太快，會影響結合效率。GST親和層析時流速適當減慢，保證足夠的結合時間?？赡茉颍壕彌_液不合適，柱子平衡不到位解決方案：GST...
【答】.含有his標簽蛋白的細胞（菌體）破碎釋放蛋白時的破碎功率不合適（太小蛋白未能完全釋放，太大蛋白碳化），此時就要優化細胞破碎的方法和條件。2.his未表達或者his蛋白表達過程中his丟失，必要時增加蛋白序列中his的個數并確保正確表達，可通過WB的方式去驗證是否有表達。3.his標簽在蛋白高級結構中暴露的不完全被包裹在蛋白結構里面，此時就要用6-8M尿素或鹽酸胍使his標簽暴露出來，同時要明確還...
【答】1） His標簽蛋白不和介質結合a可能原因：超聲功率不合適（太大，蛋白碳化，太小，蛋白沒完全釋放）解決方法：改變超聲功率或者其它方法破碎細胞。b.樣品或緩沖液不合適解決方法：確保緩沖液中螯合劑，還原劑，咪唑濃度不是很高。c.His標簽暴露不完全解決方法：在緩沖液中加變性劑（4-8M尿素，4-6M鹽酸胍），然后用IMAC介質純化。d.His標簽丟失解決方法：必要時增加His的個數并確保正確表達，同時...
【答】1、細胞凍存密度為多少合適？ 對于大多數細胞類型，1~3×106/毫升即可；對于血液細胞，需要更高的密度，推薦5×106/毫升左右。2、每只凍存管儲存多少體積細胞比較合適？ 每只凍存管中不應超過1毫升的細胞懸液，否則復溫時間過長影響細胞復...
【答】1、使用LiveTissue系列產品，凍存、復蘇的活腫瘤組織的生物活性怎樣？ 使用LiveTissue凍存、復蘇后的腫瘤組織保持70~80%的生物活性。2、凍存的活腫瘤組織是否可以替代傳統的石蠟包埋組織、冰凍切片組織嗎？ 可以。凍存的活腫瘤組織可以滿足您的多種需求。由于凍存的活腫瘤組織在復蘇后可...
【答】關于細胞標記和熒光素酶的特性 1. 熒光素酶的發光是否需要激發光？底物熒光素(Luciferin)是如何進入小鼠體內的？ 需要多少？熒光素酶的發光是生物發光，不需要激發光，但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶有554個氨基酸，約50KD。熒光素酶的底物熒光素，約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射...
